BmSPI39突变体及其应用CN114805552B-挂牌专利-西安知识产权运营服务平台

BmSPI39突变体及其应用CN114805552B 授权有效中;

专利(申请)号： CN202210609374.8
专利类型：发明;
主分类： C化学、冶金;
产业领域：家蚕蛋白酶抑制剂
专利来源：高校;
申请日： 2021-09-15
申请人：陕西理工大学
当前专利权人：陕西理工大学
交易方式：转让; 许可; 其他;
其他交易方式：产学研
参考价格（元）：￥面议
联系方式：运营平台029-65666507/29

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陕西理工大学生物科学与工程学院李游山副教授团队家蚕蛋白酶抑制剂技术；分案，母案为CN202111080025.3 BmSPI39突变体及其应用

专利详情

陕西理工大学生物科学与工程学院李游山副教授团队家蚕蛋白酶抑制剂技术

李游山，博士，副教授，硕导，汉中市青年科技领军人才，国家自然科学基金项目通讯评审专家，陕西省农作物品种审定委员会桑蚕专业委员会专家委员，陕西省“三区”科技人才，中国蚕学会会员，中国细胞生物学学会会员，西南大学前沿交叉学科研究院生物学研究中心陕西校友会会长。其带领的“先进构型材料多尺度行为创新团队”“秦巴昆虫多样性与资源化利用创新团队”成功入选陕西高校青年创新团队。主持国家自然科学基金青年项目（31702187）、陕西省自然科学基础研究计划重点项目（2022JZ-12）、陕西省教育厅重点科学研究计划项目（22JY017）、国家重点实验室开放课题（sklsgb-2019KF04）、陕西理工大学重点培育项目（SLGKYXM2202）等11项，参与国家自然科学基金等各类项目8项；发表论文40余篇，其中SCI收录14篇，其中top期刊论文8篇；授权中国国家发明专利9项，申请美国发明专利2项；获汉中市第十一届自然科学优秀学术论文奖二等奖。

陕西理工大学生物科学与工程学院起源于1958年成立的汉中大学农学系，是学校最早设立的院系之一。经过60余载的历史传承和深厚积淀，2006年学校正式成立生物科学与工程学院。学院拥有一支具有开阔视野与竞争力的教师队伍，承担着教书育人、科研创新与服务社会的使命与重任。现有教职工84人，教学科研人员72人，具有高级职称50人，博士学位54人，有“双聘院士”1人，省级教学名师1人，“汉江学者”16人，陕西省“三秦人才”津贴享受者5人；陕西省中小企业首席工程师9人，省级科技特派员30余人。现有省级教学团队2个，省级科技创新团队1个，三秦学者创新团队2个，陕西省“特支计划”4人。学院依托良好的科研条件和技术支撑平台开展科学研究，重点围绕茶资源、中药材、食药用菌资源等陕南绿色食药资源开发与利用领域取得了一系列科研成果，科研创新能力不断提高。近年来，学院获批国家级、省部级等各级各类项目189项，发表论文811篇，其中被SCI收录175篇。出版专著及教材12部，发明专利20项。获省部级科研奖13项。

《家蚕抗性因子BmSPI38和BmSPI39在丝蛋白合成和贮存中的功能研究》

BmSPI38突变体的社会推广价值主要体现在其对人类健康、环境保护和可持续发展的潜在贡献。如果该突变体能够用于开发新药，那么它将可能对公共健康产生重要影响，此外，如果该突变体能够提高农作物产量，那么它将可能有助于解决食品安全和饥饿问题,因此专利技术具有广泛的市场前景和推广应用价值。在未来，随着生物科学技术的进步和纳米医学的发展，BmSPI39的同型串联多聚体在药物递送、生物传感器等领域的应用将更加广泛，主要技术优势在于本专利独特的单元模块构建和算法优化。

摘要

【中文摘要】本发明属于基因工程和酶工程技术领域，具体涉及BmSPI39突变体及其应用。BmSPI39是由SEQ ID NO.1中第25位至第98位组成，所述BmSPI39突变体是将BmSPI39氨基酸序列，如SEQ ID NO.1所示第56位的丙氨酸突变为精氨酸、赖氨酸、丝氨酸、苏氨酸、谷氨酰胺、酪氨酸、甲硫氨酸、亮氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、组氨酸、半胱氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、异亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、脯氨酸或甘氨酸获得的。本发明的BmSPI39突变体均对枯草杆菌蛋白酶和弹性蛋白酶具有抑制活性，且当突变为精氨酸或赖氨酸后，还获得了胰蛋白酶抑制活性，此类突变体可用于制备胰蛋白酶抑制剂，应用前景良好。

【英文摘要】The present invention belongs to the field of genetic engineering and enzyme engineering technology, specifically relates to BmSPI39 mutant and its application. BmSPI39 is composed of positions 25 to 98 in SEQ ID NO.1, the BmSPI39 mutant is obtained by mutating the BmSPI39 amino acid sequence, as shown in SEQ ID NO.1 at position 56 alanine to arginine, lysine, serine, threonine, glutamine, tyrosine, methionine, leucine, aspartic acid, glutamic acid, histidine, cysteine, valine, asparagine, isoleucine, phenylalanine, tryptophan, proline or glycine. The BmSPI39 mutants of the present invention have inhibitory activity against subtilis protease and elastase, and when mutated to arginine or lysine, trypsin inhibitory activity is also obtained, such mutants can be used to prepare trypsin inhibitors, and the application prospect is good.

技术摘要（来自于incoPat）

【 DWPI用途】

BmSPI39突变体可用于制备蛋白酶抑制剂(要求保护)、枯草杆菌蛋白酶抑制剂、弹性蛋白酶抑制剂和胰蛋白酶抑制剂。

【 DWPI新颖性】

要求保护家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂39(BmSPI39)突变体在制备蛋白酶抑制剂中的用途，其中所述蛋白酶包括枯草杆菌蛋白酶、弹性蛋白酶和胰蛋白酶。 BmSPI39包含在说明书中完全定义的98氨基酸序列(SEQ ID NO：1)的位置25-98处的氨基酸。所述BmSPI39突变体是将SEQ ID NO：1的BmSPI39中第56位的丙氨酸突变为赖氨酸或精氨酸得到的。

【 DWPI技术要点】

优选方法：所述BmSPI39突变体通过对说明书中完全定义的野生型BmSPI39碱基对序列(SEQ ID NO : 2)的基因序列，使用定点诱变引物进行定点诱变获得。所述BmSPI39突变体的构建方法包括：(a)设计上下游引物均具有突变位点的定点突变引物; (b)以DNA聚合酶和特异性突变引物，以BmSPI39-p28载体为模板，进行PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳检测反应产物; (c)以Dpn I进行酶切反应; (d)将PCR产物转化入Trans1-T1感受态细胞，挑选阳性克隆进行测序验证，提取突变质粒; (e)将突变质粒转化宿主表达菌株，诱导表达，得到BmSPI39突变体。

【用途】

医药医疗	抑制剂	弹性蛋白酶抑制剂;枯草杆菌蛋白酶抑制剂;胰蛋白酶抑制剂;蛋白酶抑制剂
方法过程	制备方法	制备
生物(体)	突变体	bmspi39突变体

【技术功效】

技术功效句	弹性蛋白酶抑制活性的箭头指示蛋白酶活性抑制条带; 除BmSPI39、BmSPI39、BmSPI39、BmSPI39对弹性蛋白酶抑制活性增强之外; “EI”表示弹性蛋白酶抑制活性; 而且BmSPI39、BmSPI39还获得了胰蛋白酶抑制活性; “M”表示蛋白分子量标准
技术功效短语	抑制活性; 抑制条带; 标准; 获得酶
技术功效1级	活性; 条带; 标准; 酶
技术功效2级	活性降低; 条带降低; 标准; 酶
技术功效3级	活性降低; 条带降低; 标准; 获得酶

分类号

【技术分类】

主分类号	C07K14/81; C 化学；冶金 C07 有机化学〔2〕 C07K 肽（含有β-内酰胺的肽入C07D；在分子中除了形成本身的肽环外不含有任何其他的肽键的环状二肽，如哌嗪-2,5-二酮入C07D；环肽型麦角生物碱入C07D519/02；单细胞蛋白质、酶入C12N；获得肽的基因工程方法入C12N15/00）〔4〕 C07K14/00 具有多于20个氨基酸的肽；促胃液素；生长激素释放抑制因子；促黑激素；其衍生物[2006.01] *C07K14/81 蛋白酶抑制剂[2006.01]
IPC分类号	C07K14/81; C07K14/435; C12N15/70;
CPC分类号	C07K14/81; C07K14/43586; C12N15/70; Y02A50/30;
DWPI分类号	B04; D16;
DWPI手工代码	B04-E99; B04-L04A; B04-L0500E; D05-A02B; D05-H99;

【行业分类】

国民经济行业分类	制造业 C2663;C2762;C2662;C2684;C2761;C2661;C3521;C2614;C4090;
国民经济行业(主)	制造业 C2663;C2662;C2684;C2661;C3521;C2614;C4090;
新兴产业分类	生物医药产业生物农业及相关产业 4.1;4.3;
新兴产业(主)	生物医药产业 4.1;
知识密集型分类	新装备制造业新材料制造业医药医疗产业 302; 403; 501;
学科分类	生命科学与生物医学物理科学 B040101; B060101; C050102;
清洁能源产业	太阳能产业生物质能产业传统能源清洁高效利用产业 3.1.0; 3.2.0; 4.1.2; 8.1.0;
清洁生产产业	清洁生产原料制造业 1.2.0;

专利历程

2021-09-15
申请日
CN202111080025.3
申请号母案
CN202210609374.8(当前专利)
申请号
2022-07-29
首次公开日
CN114805552A
首次公开号
2023-05-12
授权公告日
CN114805552B(当前专利)
授权公告号
2041-09-15
预估到期日
计算因素

同族专利（来自于incoPat）

DWPI基本专利	CN114805552A;
DWPI同族公开号	中国 CN114805552B; CN114805552A;
同族专利公开号	中国 CN114805552A; CN114805552B;
扩展同族公开号	中国 CN113683682A; CN114805552A; CN114805552B; CN113683682B;
DocDB公开号	中国 CN114805552B; CN113683682A; CN113683682B; CN114805552A;
DWPI同族国家/地区	中国;

其他著录项

代理机构	西安铭泽知识产权代理事务所(普通合伙) 61223
代理人	崔瑞迎
申请语言	汉语
审查员	黄炎
母案	CN202111080025.3 20210915

权利要求

1.BmSPI39突变体在制备蛋白酶抑制剂中的应用，其特征在于，所述蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶、弹性蛋白酶和胰蛋白酶；BmSPI39是由SEQ ID NO.1中第25位至第98位组成；
所述BmSPI39突变体是将BmSPI39氨基酸列中如SEQ ID NO.1所示第56位的丙氨酸突变为赖氨酸或精氨酸。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，是利用定点突变引物对如SEQ ID NO.2所示野生型BmSPI39的基因序列进行定点突变，得到所述BmSPI39突变体。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述BmSPI39突变体的构建方法，包括如下步骤：
S1、设计定点突变引物，使上下游引物都带有突变位点；
S2、以BmSPI39‑p28载体作为模板，使用DNA聚合酶，用特异性突变引物进行PCR反应扩增，反应产物用琼脂糖凝胶电泳进行检测；
S3、利用Dpn I进行酶切反应处理PCR产物；
S4、将酶切反应处理的PCR产物转化入Trans1‑T1感受态细胞，挑选阳性克隆进行测序验证，提取突变质粒；
S5、将突变质粒转入宿主表达菌株中，诱导表达得到BmSPI39突变体。

专利文本

CN114805552B_BmSPI39突变体及其应用